及時(shí)解決大小鼠脊髓模具故障是保障其正常使用的核心
大小鼠脊髓模具是神經(jīng)科學(xué)研究中用于脊髓組織標(biāo)準(zhǔn)化取材、固定與切片的關(guān)鍵輔助工具。其精密槽道設(shè)計(jì)可有效保持脊髓解剖完整性,提升實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。在實(shí)際操作中,可能會因組織處理不當(dāng)、模具匹配錯(cuò)誤或操作粗放導(dǎo)致組織變形、斷裂、脫模困難等問題,嚴(yán)重影響后續(xù)染色、成像及數(shù)據(jù)分析??茖W(xué)識別大小鼠脊髓模具出現(xiàn)故障的根源并采取針對性措施,是保障其正常使用的核心。

一、脊髓在模具中移位或漂浮
原因:包埋劑注入過快產(chǎn)生氣泡,或OCT未充分浸潤組織。
解決方法:
緩慢傾斜注入OCT,讓液體自然填充槽道,避免沖擊脊髓;
用細(xì)針輕壓脊髓使其貼底,再補(bǔ)加包埋劑;
對固定后較硬的脊髓,可先在模具中滴少量OCT預(yù)粘附,再整體包埋。
二、脫模時(shí)組織斷裂或粘連模具
多因冷凍不充分或模具未預(yù)冷:
確保模具與OCT塊在–80℃冷凍≥30分鐘,形成均勻冰晶結(jié)構(gòu);
脫模前將模具短暫置于室溫(1–2秒)或用手心微熱外壁,使OCT輕微融化即可輕松脫出;
若反復(fù)粘連,可在模具內(nèi)壁薄涂一層防粘劑(如稀釋的甘油),但需避免污染組織。
三、切片時(shí)脊髓橫斷面不完整或碎裂
典型為組織未固定或冷凍速率不當(dāng):
灌注后脊髓需在4%多聚甲醛中后固定12–24小時(shí)(4℃),增強(qiáng)韌性;
冰凍切片前避免反復(fù)凍融,防止冰晶破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu);
切片刀保持鋒利,切片速度調(diào)慢,溫度控制在–18℃至–22℃。
四、模具槽道殘留OCT或石蠟難以清除
OCT殘留:用溫水(≤40℃)浸泡10分鐘軟化后沖洗,勿用熱水以防模具變形;
石蠟殘留:浸泡于二甲苯或?qū)S妹撓炓褐腥芙?,再用乙醇梯度清洗?/div>
清潔后晾干,避免水漬腐蝕金屬模具。
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